细胞凋亡检测都有哪些

细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常结构和器官的细胞恒定与生长平衡，乃至机体衰老方面都起着严重作用。因而，有关凋亡的研究在临床和底子等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测妙招显得非常严重。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技能、激光光学技能、电子技能和计算机技能等集于一体,较其它妙招有不可比拟的优越性，既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。

1、光散射法

在FCM 系统中，被检细胞在液流中经过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞尺寸有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂造成,细胞内颗粒时常增加,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。

2 、细胞DNA 含量的测定

细胞凋亡时,核酸内切酶激活,引起DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了底子。而检测细胞凋亡DNA 断裂的妙招中,最老用、最简便的旧是细胞DNA 含量。

3 、Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)

AO 可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或经过变性而出现的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因而,经过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。

4 、若丹明( Rh123) 染色法

细胞生活状况下,胞膜上的钠- 钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外保持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,造成细胞膜电位。FCM 才能检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。

5 、原位根部标记技能

细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减轻,原位根部标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而出现的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种妙招: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②根部脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口根部标记( TUNEL) 。